3分鐘了解下cck8細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒的操作說明

　　cck8細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)依賴于脫氫酶催化的反應(yīng)，如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性，可在加CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基，去掉藥物的影響。若藥物影響比較小的情況可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸光度即可。
 

　　cck8細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒的操作說明：
 

　　1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液(100μL/孔)，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔約2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔約5000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等因素決定)。
 

　　2、按照實(shí)驗(yàn)需要，進(jìn)行培養(yǎng)并給予0-10μL特定的藥物刺激，并孵育一段時(shí)間(例如:6、12、24或48小時(shí))。
 

　　3、向每孔加入10μLCCK-8溶液。如果起始的培養(yǎng)體積為200μL，則需加入20μLCCK-8溶液，以此類推。
 

　　4、在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育1-4小時(shí)，具體時(shí)間可以通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定。
 

　　5、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光值，若無450nm濾光片，可以使用420-480nm的濾光片，但是450nm檢測(cè)靈敏度最高。如果樣品為高渾濁度的細(xì)胞懸液，可以使用大于600nm的波長(zhǎng)，例如650nm，作為參考波長(zhǎng)進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定。
 

　　6、如果需要暫時(shí)不測(cè)定O.D值，可以向每孔中加入10μL0.1MHCl溶液或者1%w/v的SDS溶液，避光保存在室溫，24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。