３分鐘學(xué)會(huì)電泳轉(zhuǎn)移緩沖液的使用方法

　　電泳轉(zhuǎn)移緩沖液是一種運(yùn)用于分子生物學(xué)研究中電泳技術(shù)的重要試劑。電泳轉(zhuǎn)移緩沖液的功能是在電泳結(jié)束后將凝膠中分離的帶狀DNA、RNA、蛋白質(zhì)等生物分子轉(zhuǎn)移到光滑的硬膜上，以便后續(xù)的檢測(cè)、識(shí)別、定量等工作。
 

　　電泳轉(zhuǎn)移緩沖液的使用方法，一般包括以下幾個(gè)環(huán)節(jié)：
 

　　1、準(zhǔn)備光滑硬膜
 

　　在開始轉(zhuǎn)移之前，需要將需要轉(zhuǎn)移的生物分子的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分離帶通過電泳移至凝膠中央，在這之后，需要準(zhǔn)備一塊光滑的硬膜來接收分離的帶狀分子。硬膜的材質(zhì)一般是聚氟乙烯、聚丙烯或硅膠等。
 

　　2、泡制電泳緩沖液
 

　　根據(jù)特定的樣品，需要選擇特殊的電泳緩沖液，可分為常用的轉(zhuǎn)移緩沖液和蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移緩沖液兩種。常規(guī)轉(zhuǎn)移緩沖液的一般組成為甲酸(0.06M)和Tris-蛋白酸(0.025M)，pH值調(diào)節(jié)至8.3左右。蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移緩沖液的組成也不同，其中包括引物、脯氨酸和甘氨酸等。在制備電泳緩沖液時(shí)，一般需要將其溶解于水中，并將pH值調(diào)整到的水平。
 

　　3、組裝電泳轉(zhuǎn)移單元
 

　　在電泳轉(zhuǎn)移之前，需要將制備的硬膜放置在電泳轉(zhuǎn)移單元的陽極側(cè)。在陽極側(cè)的上面，可以擺放吸水毛細(xì)管，在電泳緩沖液池的頂部也需要安裝帶濾紙的離子加工盒子。在開始時(shí)，先在離子加工盒子、水毛細(xì)管和硬膜之間放置吸水紙和濾紙，以防止在生物分子傳輸中產(chǎn)生空氣泡。
 

　　4、開始轉(zhuǎn)移
 

　　在準(zhǔn)備好電泳轉(zhuǎn)移單元之后，需要將調(diào)節(jié)pH值的電泳緩沖液盛放于電泳池中。之后，將已切割的凝膠貼上硬膜，然后將其壓至硬膜表面。在準(zhǔn)備好凝膠的條件之下，將準(zhǔn)備好的凝膠一起懸掛于已裝載了溶液的鉑絡(luò)合物緩沖池中。隨著負(fù)極電流流過，生物分子帶將逐漸遷移到硬膜上。轉(zhuǎn)移時(shí)間一般根據(jù)具體的生物分子質(zhì)量確定，通常設(shè)置在半小時(shí)至數(shù)小時(shí)之間。
 

　　5、染色和檢測(cè)
 

　　經(jīng)過電泳轉(zhuǎn)移和硬膜固定后，需要進(jìn)一步處理并檢測(cè)生物分子的表現(xiàn)情況。染色一般使用銀染、Coomassie藍(lán)染色或卡羅林鈷染色等方法。之后，使用熒光探針、放射性探針或酶標(biāo)記法等技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。